(Проточная цитометрия, FCM) — это анализатор клеток, который измеряет интенсивность флуоресценции окрашенных маркеров клеток. Это высокотехнологичная технология, разработанная на основе анализа и сортировки отдельных клеток. Она может быстро измерять и классифицировать размер, внутреннюю структуру, ДНК, РНК, белки, антигены и другие физические или химические свойства клеток, и может быть основана на сборе этих классификаций.
Проточный цитометр в основном состоит из следующих пяти частей:
1 Проточная камера и система струйной автоматики
2. Лазерный источник света и система формирования луча
3 Оптическая система
4 Электроника, система хранения, отображения и анализа
5 Система сортировки клеток
Среди них лазерное возбуждение в лазерном источнике света и системе формирования луча является основным измерением сигналов флуоресценции в проточной цитометрии. Интенсивность возбуждающего света и время экспозиции связаны с интенсивностью сигнала флуоресценции. Лазер является когерентным источником света, который может обеспечить одноволновое, высокоинтенсивное и высокостабильное освещение. Это идеальный источник возбуждающего света для удовлетворения этих требований.
Между источником лазера и камерой потока находятся две цилиндрические линзы. Эти линзы фокусируют лазерный луч с круглым поперечным сечением, испускаемый источником лазера, в эллиптический луч с меньшим поперечным сечением (22 мкм × 66 мкм). Энергия лазера в этом эллиптическом луче распределяется в соответствии с нормальным распределением, обеспечивая постоянную интенсивность освещения для клеток, проходящих через зону обнаружения лазера. С другой стороны, оптическая система состоит из нескольких наборов линз, отверстий и фильтров, которые можно условно разделить на две группы: выше и ниже по потоку от камеры потока.
Оптическая система перед проточной камерой состоит из линзы и пинхола. Основная функция линзы и пинхола (обычно двух линз и пинхола) заключается в фокусировке лазерного луча с круглым поперечным сечением, испускаемого лазерным источником, в эллиптический луч с меньшим поперечным сечением. Это распределяет энергию лазера в соответствии с нормальным распределением, обеспечивая постоянную интенсивность освещения для клеток по всей зоне обнаружения лазера и минимизируя помехи от рассеянного света.
Существует три основных типа фильтров:
1: Фильтр длинных волн (ФНЧ) — пропускает только свет с длиной волны выше определенного значения.
2: Фильтр короткого пропускания (SPF) — пропускает только свет с длиной волны ниже определенного значения.
3: Полосовой фильтр (ПФ) — пропускает только свет определенного диапазона длин волн.
Различные комбинации фильтров могут направлять сигналы флуоресценции на разных длинах волн на отдельные фотоумножители (ФЭУ). Например, фильтры для обнаружения зеленой флуоресценции (FITC) перед ФЭУ — это LPF550 и BPF525. Фильтры, используемые для обнаружения оранжево-красной флуоресценции (PE) перед ФЭУ — это LPF600 и BPF575. Фильтры для обнаружения красной флуоресценции (CY5) перед ФЭУ — это LPF650 и BPF675.
Проточная цитометрия в основном используется для сортировки клеток. С развитием компьютерных технологий, развитием иммунологии и изобретением технологии моноклональных антител ее применение в биологии, медицине, фармацевтике и других областях становится все более распространенным. Эти приложения включают анализ динамики клеток, апоптоз клеток, типирование клеток, диагностику опухолей, анализ эффективности лекарств и т. д.
Время публикации: 21-сен-2023
