(Проточная цитометрия, FCM) - это анализатор клеточного анализа, который измеряет интенсивность флуоресценции окрашенных клеточных маркеров. Это высокотехнологичная технология, разработанная на основе анализа и сортировки отдельных клеток. Он может быстро измерить и классифицировать размер, внутреннюю структуру, ДНК, РНК, белки, антигены и другие физические или химические свойства клеток и может основываться на сборе этих классификаций.
Проточный цитометр в основном состоит из следующих пяти частей:
1 Проточная камера и система жидкости
2 лазерной источники света и система формирования луча
3 Оптическая система
4 Система электроники, хранения, отображения и анализа
5 Система сортировки ячеек
Среди них лазерное возбуждение в лазерном источнике света и системе формирования луча является основным измерением флуоресцентных сигналов в проточной цитометрии. Интенсивность света возбуждения и время воздействия связаны с интенсивностью флуоресцентного сигнала. Лазер-это когерентный источник света, который может обеспечить одноволновую длину, высокую интенсивность и высокую стабильность. Это идеальный источник света возбуждения для удовлетворения этих требований.
Существует две цилиндрические линзы между лазерным источником и проточной камерой. Эти линзы фокусируют лазерный луч с круглым поперечным сечением, испускаемым из лазерного источника в эллиптический луч с меньшим поперечным сечением (22 мкм × 66 мкм). Энергия лазера в этом эллиптическом луче распределяется в соответствии с нормальным распределением, обеспечивая постоянную интенсивность освещения для ячеек, проходящих через область обнаружения лазера. С другой стороны, оптическая система состоит из нескольких наборов линз, выходов и фильтров, которые могут быть примерно разделены на две группы: вверх по течению и ниже проточной камеры.
Оптическая система перед проточной камерой состоит из линзы и руку. Основная функция линзы и шестерни (обычно две линзы и шестерна) состоит в том, чтобы сфокусировать лазерный луч с круглым поперечным сечением, испускаемым лазерным источником в эллиптическую луч с меньшим поперечным сечением. Это распределяет лазерную энергию в соответствии с нормальным распределением, обеспечивая постоянную интенсивность освещения для ячеек по площади лазерной обнаружения и минимизации интерференций от бродячих света.
Есть три основных типа фильтров:
1: фильтр длинного прохода (LPF) - только позволяет свету с длиной волн выше, чем конкретное значение для прохождения.
2: фильтр короткого прохождения (SPF) - только позволяет свету с длиной волн ниже определенного значения для прохождения.
3: полосовой фильтр (BPF) - позволяет пройти свет только в определенном диапазоне длины волны.
Различные комбинации фильтров могут направлять сигналы флуоресценции на разных длинах волн в отдельные фотоумножительные трубки (PMT). Например, фильтры для обнаружения зеленой флуоресценции (FITC) перед PMT являются LPF550 и BPF525. Фильтры, используемые для обнаружения оранжево-красной флуоресценции (PE) перед PMT, представляют собой LPF600 и BPF575. Фильтры для обнаружения красной флуоресценции (CY5) перед PMT представляют собой LPF650 и BPF675.
Проточная цитометрия в основном используется для сортировки клеток. С развитием компьютерных технологий, развитию иммунологии и изобретения технологии моноклональных антител, ее применение в области биологии, медицины, аптеки и других областей становится все более широко распространенным. Эти приложения включают анализ динамики клеток, апоптоз клеток, типирование клеток, диагностику опухоли, анализ эффективности лекарственного средства и т. Д.
Время публикации: сентябрь-21-2023
