(Проточная цитометрия, FCM) — клеточный анализатор, измеряющий интенсивность флуоресценции окрашенных клеточных маркеров. Это высокотехнологичная технология, разработанная на основе анализа и сортировки одиночных клеток. Он может быстро измерять и классифицировать размер, внутреннюю структуру, ДНК, РНК, белки, антигены и другие физические или химические свойства клеток и может основываться на совокупности этих классификаций.
Проточный цитометр в основном состоит из следующих пяти частей:
1 Проточная камера и система струйной аппаратуры
2 Источник лазерного света и система формирования луча
3 Оптическая система
4 Электроника, система хранения, отображения и анализа
5 Система сортировки клеток
Среди них лазерное возбуждение в источнике лазерного света и системе формирования луча является основным измерением сигналов флуоресценции в проточной цитометрии. Интенсивность возбуждающего света и время экспозиции связаны с интенсивностью сигнала флуоресценции. Лазер — это источник когерентного света, который может обеспечить одноволновое, высокоинтенсивное и высокостабильное освещение. Это идеальный источник возбуждающего света, отвечающий этим требованиям.
Между лазерным источником и проточной камерой расположены две цилиндрические линзы. Эти линзы фокусируют лазерный луч круглого сечения, испускаемый лазерным источником, в эллиптический луч меньшего сечения (22 мкм × 66 мкм). Энергия лазера внутри этого эллиптического луча распределяется в соответствии с нормальным распределением, обеспечивая постоянную интенсивность освещения для клеток, проходящих через зону обнаружения лазера. С другой стороны, оптическая система состоит из нескольких наборов линз, отверстий и фильтров, которые можно грубо разделить на две группы: перед и после проточной камеры.
Оптическая система перед проточной камерой состоит из линзы и обскуры. Основная функция линзы и обскуры (обычно две линзы и обскура) заключается в фокусировке лазерного луча круглого сечения, испускаемого лазерным источником, в эллиптический луч с меньшим поперечным сечением. Это распределяет энергию лазера в соответствии с нормальным распределением, обеспечивая постоянную интенсивность освещения клеток по всей зоне обнаружения лазера и сводя к минимуму помехи от рассеянного света.
Существует три основных типа фильтров:
1: Фильтр длинного пропускания (LPF) — пропускает только свет с длиной волны выше определенного значения.
2: Фильтр короткого прохода (SPF) — пропускает только свет с длиной волны ниже определенного значения.
3: Полосовой фильтр (BPF) — пропускает свет только в определенном диапазоне длин волн.
Различные комбинации фильтров могут направлять сигналы флуоресценции на разных длинах волн на отдельные фотоумножители (ФЭУ). Например, фильтры для обнаружения зеленой флуоресценции (FITC) перед ФЭУ — это LPF550 и BPF525. Для обнаружения оранжево-красной флуоресценции (PE) перед ФЭУ используются фильтры LPF600 и BPF575. Фильтры для обнаружения красной флуоресценции (CY5) перед ФЭУ: LPF650 и BPF675.
Проточная цитометрия в основном используется для сортировки клеток. С развитием компьютерных технологий, развитием иммунологии и изобретением технологии моноклональных антител их применение в биологии, медицине, фармации и других областях становится все более распространенным. Эти приложения включают анализ динамики клеток, апоптоз клеток, типирование клеток, диагностику опухолей, анализ эффективности лекарств и т. д.
Время публикации: 21 сентября 2023 г.
